NgAgo目前主要被发现具有DNA依赖的RNA酶活性，可切割RNA而非DNA，其基因编辑功能的可重复性仍存在争议，韩国科学家的最新研究为解释此前多个实验室的争议性结果提供了线索，但尚未完全终结争议。
2017年1月20日，韩国国立首尔大学Jin-Soo Kim课题组在BioRxiv预印本平台发表研究，通过体外生化实验发现NgAgo蛋白具有DNA依赖的RNA酶活性，能够切割RNA而非DNA。其结合的DNA序列（gODNs）必须与靶RNA反向互补，正义DNA序列无法引导切割。
研究还发现，gODNs长度需至少13个核苷酸才能介导RNA酶活性，且第5-14位碱基的匹配对酶活性至关重要。与Cas9不同，NgAgo可多次循环催化RNA切割。
该研究未提供细胞内实验结果，但解释了此前多个实验室观察到的现象：NgAgo可能通过切割RNA而非DNA来降低基因表达，而非直接编辑基因组。
对NgAgo功能的重新理解
RNA切割机制：NgAgo通过结合与靶RNA反向互补的DNA序列，定位并切割RNA，这一机制与Cas9的DNA编辑功能不同，但类似其他Ago家族蛋白（如Aa-Ago、Mp-Ago）的DNA依赖性RNA切割活性。
基因表达调控：NgAgo可能通过降解靶mRNA或抑制转录来降低基因表达，而非直接修改DNA序列。这一发现解释了此前实验中观察到的荧光衰减或发育缺陷现象，但未证实基因组编辑功能。
对争议性实验结果的解释
斑马鱼实验：南通大学刘东实验室和复旦大学王永明实验室发现NgAgo-gDNA系统未表现基因编辑功能，但敲低了基因表达。Kim的研究支持这一结果，指出NgAgo的RNA酶活性可能导致基因下调。
突变体实验：刘东等发现NgAgo的三个突变体（D663A, D738A, D663A/D738A）与野生型表型相同，Kim的研究表明这些突变不影响RNA酶活性，进一步验证了RNA切割机制。
未解释的现象：刘东等还发现，即使介导DNA与mRNA序列相同，仍存在基因下调活性。Kim的结果仅解释了反向互补情况，刘东推测DNA介导的NgAgo可能通过结合靶基因抑制转录。
基因编辑功能争议的背景
初始报道：2016年5月，韩春雨团队在《自然-生物技术》报道NgAgo-gDNA系统可能是一种新型基因编辑工具，引发广泛关注。
质疑声起：2016年8月起，多个实验室表示无法重复基因编辑结果，仅观察到基因表达下调。11月，20位科学家在《蛋白质与细胞》和《自然-生物技术》发表来信，质疑NgAgo的基因组编辑能力。
调查进展：《自然-生物技术》原计划于2017年1月底公布调查结果，后表示获得新数据需进一步研究。河北科技大学与诺维信公司签署合作协议，但诺维信未确认重复性结果，仅称“看到有用迹象”。
韩国研究的意义与局限性
意义：
明确了NgAgo的RNA酶活性，为解释此前争议性结果提供了机制基础。
刺激了Ago家族蛋白功能的研究，可能推动新型基因调控工具的开发。
局限性：
缺乏细胞内实验证据，无法完全排除NgAgo在特定条件下编辑DNA的可能性。
未解释所有观察到的现象（如正向DNA序列的基因下调活性），需进一步研究。
未来研究方向
细胞内实验验证：需在细胞或活体模型中验证NgAgo的RNA切割活性及其生理功能。
机制深化研究：探索NgAgo如何结合DNA、定位RNA以及调控基因表达的具体分子机制。
应用潜力评估：评估NgAgo作为RNA调控工具的潜力，与现有技术（如RNAi、CRISPR-Cas13）对比优势与局限性。
总结：韩国科学家的研究揭示了NgAgo可能通过切割RNA调控基因表达，而非直接编辑DNA，为解释此前争议提供了重要线索。然而，NgAgo的基因编辑功能仍需更多证据支持，其真实作用机制与应用潜力需进一步探索。
