2000年版本的《阿尔戈英雄传》主要角色介绍如下：
Medea：由乔琳纳·布拉洛克饰演，是科尔基斯国王埃厄忒斯的女儿，精通魔法与草药。她因爱上伊阿宋而背叛父亲，协助阿尔戈英雄完成夺取金羊毛的任务，其角色充满复杂性与悲剧色彩，展现了爱情与忠诚的冲突。
Pelias：丹尼斯·霍珀饰演，是伊俄尔科斯的国王，伊阿宋的叔叔。他篡夺王位后，为巩固权力派遣伊阿宋寻找金羊毛，试图借机除掉他，是推动剧情发展的关键反派。
Aertes：弗兰克·兰格拉饰演，科尔基斯国王，美狄亚的父亲。他拥有金羊毛并设下重重考验阻止外人夺取，其角色体现了权力与守护的严苛性。
Hypsipyle：娜塔莎·亨斯屈奇饰演，莱姆诺斯岛的女王。阿尔戈英雄曾在此停留，她与英雄们产生情感纠葛，角色展现了女性在男性主导叙事中的独立与情感张力。
Phineas：德里克·雅各比饰演，被宙斯惩罚的盲眼先知。他因泄露天机被囚禁，后为阿尔戈英雄指引迷津，其角色象征智慧与命运的对抗。
Hercules：布莱恩·汤普森饰演，希腊神话中的大力神。他以勇猛著称，在冒险中多次展现超凡力量，是英雄团队的核心战力之一。
Argos：大卫·卡尔德饰演，阿尔戈号的建造者。他设计并打造了这艘传奇之船，其角色代表了人类智慧与工艺的结晶。
Zeus：安古斯·麦克菲登饰演，希腊神话中的众神之王。他以雷霆掌控命运，暗中干预英雄们的旅程，体现神权对人类世界的绝对支配。
Hera：奥莉维亚·威廉姆斯饰演，宙斯的妻子，婚姻与家庭的保护神。她暗中支持阿尔戈英雄，尤其是针对宙斯的私生子赫拉克勒斯，角色凸显了神界内部的权力博弈。
Castor与Pollux：分别由欧米德·吉亚李利和约翰·沙拉恩饰演，双子兄弟，阿尔戈英雄的成员。他们以默契配合著称，象征兄弟情谊与团队协作。
Atalanta：阿德里安·莱斯特饰演，唯一的女性英雄，以箭术与狩猎技能闻名。她拒绝传统性别角色，展现了女性在冒险中的独立与能力。
Orpheus：Rhys Miles Thomas饰演，诗人与音乐家。他以竖琴驯服野兽、感动冥界，其角色赋予冒险以艺术与灵魂的维度。
Jason：由杰森·伦敦和马克·刘易斯·琼斯分饰，阿尔戈英雄的领袖。他因叔叔篡位而踏上寻找金羊毛的征程，其角色融合了勇气、智慧与领导力，是英雄主义的化身。
